Elishay to'plamlari sinovlari uchun talablar

Rasmiy testda yaxshi kontrastni bajaring, ijobiy va salbiy nazoratning sinov shartlari olinishi kerak va sinov natijalarining to'g'riligini ta'minlash uchun sinovdan o'tkaziladigan namunalar ikki nusxada tayyorlanishi kerak.

Ba'zan fon yuqori bo'lib, o'ziga xos bo'lmagan reaktsiyani ko'rsatadi, qo'y zardobi, quyon zardobi yoki BSA bilan yopilishi mumkin.

Eksperimental sharoitlarni tanlash

Elishay usulida turli eksperimental sharoitlarni tanlash muhim, jumladan: (1) Qattiq{1}}fazali tashuvchilarni tanlash: PVX, polistirol, poliakrilamid va tsellyuloza kabi qattiq-fazali tashuvchilar sifatida ko‘p moddalardan foydalanish mumkin. U konkav plastinka, sinov naychasi, boncuk va boshqalar shaklini olishi mumkin. Hozirgi vaqtda u odatda 40 quduqli polistirol konkav plitalari uchun ishlatiladi.

Qaysi turdagi tashuvchi bo'lishidan qat'i nazar, ishlatishdan oldin tekshirilishi mumkin: bir xil miqdordagi antigen paketi bilan bir xil eksperimental sharoitda reaksiyaga kirishish, uning rang berish reaktsiyasi bir hilmi yoki yo'qligini kuzatish, unga ko'ra u yaxshi adsorbsion ko'rsatkichdir. (2) Antikor (yoki antijen) tanlash bo'yicha qadoqlash: qattiq faza tashuvchisi yuzasida adsorbsiyalangan antikor (yoki antijen), talabning jiddiyligi yaxshiroq, adsorbsiya uchun odatda 9,0 dan 9,6 gacha bo'lgan PH kerak. Adsorbsiya harorati, vaqti va oqsil miqdori ham ma'lum bir ta'sirga ega, odatda 4 darajadan ortiq C 18 dan 24 soatgacha. Protein paketlarining optimal konsentratsiyasini titrlash kerak: turli xil protein konsentrasiyalari (0,1, 1,0 va 10 ?g/ml va boshqalar) bilan qadoqlangandan so'ng, musbat namunalarning OD qiymatlari boshqa sinov shartlari bir xil bo'lganda kuzatiladi. Eng katta OD qiymati va eng kam protein miqdori bilan konsentratsiyani tanlang.

Aksariyat oqsillar uchun odatda 1 dan 10 ?g/ml gacha. (3) Enzim -belgilangan antikor ish kontsentratsiyasini tanlash: birinchidan, to'g'ridan-to'g'ri Elishay usuli yordamida titrlashning dastlabki ta'siri (qarang: ferment -belgilangan antikor qismi).

Keyin boshqa shartlarni tuzating yoki rasmiy eksperimental tizimda "kvadrat massiv usuli" ni oling (to'plamning keskinligi, tekshirilayotgan namuna uchun ma'lumotnoma va ferment{0}}yorliqli antikorlar turli suyultirishdir) uning ish konsentratsiyasini aniq titrlaydi. (4) Ferment asosini va vodorod donorini tanlash: vodorod donorini tanlash arzon, xavfsiz, aniq rang berish reaktsiyasi- va o'zi rangsizdir. Ba'zi vodorod donorlari (masalan, OPD va boshqalar) potentsial kanserogen ta'sirga ega, ularni himoya qilish uchun ehtiyot bo'lish kerak. Shartli odamlar kanserogen bo'lmagan{9}}vodorod donorlaridan foydalanishlari kerak, TMB va ABTS kabi yuqori sezuvchanlik vodorod donorlari hozirda ancha qoniqarli. Bir muddat ta'sir qilgandan so'ng, reaktsiyani to'xtatish uchun kuchli kislotalar yoki gidroksidi qo'shilishi kerak. Odatda substratning ta'sir qilish vaqti 10-30 minutgacha mos keladi. Substratdan foydalanish suyuqligi, ayniqsa foydalanishdan oldin H2O2 qo'shilsa, yangi tayyorlangan bo'lishi kerak.